题目
在PCR反应中,下列哪个步骤是利用热稳定DNA聚合酶进行的?A. 延伸B. 退火C. 预变性D. 冷却E. 变性
在PCR反应中,下列哪个步骤是利用热稳定DNA聚合酶进行的?
A. 延伸
B. 退火
C. 预变性
D. 冷却
E. 变性
题目解答
答案
A. 延伸
解析
本题考查PCR反应的基本步骤以及热稳定DNA聚合酶在其中的作用。解题思路是先明确PCR反应的各个步骤,再分析每个步骤的作用以及热稳定DNA聚合酶在哪个步骤发挥作用。
PCR反应主要包括以下几个步骤:
- 预变性:将反应体系加热至94 - 98℃,目的是使双链DNA模板在高温下解旋成为单链,为后续引物与模板结合以及DNA聚合酶延伸做准备。此步骤不需要热稳定DNA聚合酶参与,因为只是单纯的解链过程。
- 退火:将温度降低至50 - 65℃,引物与单链DNA模板的特定互补序列结合。这一步是引物与模板的结合过程,热稳定DNA聚合酶在此步骤不发挥作用。
- 延伸:将温度调整到70 - 75℃,热稳定DNA聚合酶(如Taq酶)以引物为起点,以四种脱氧核苷酸为原料,按照碱基互补配对原则,沿着模板链合成新的DNA链。所以延伸步骤是利用热稳定DNA聚合酶进行的。
- 冷却:一般不是PCR反应的标准步骤,在常规PCR循环中没有专门的冷却步骤。
- 变性:在每个循环开始时,将温度升高到94 - 98℃,使双链DNA再次解旋为单链,同样不需要热稳定DNA聚合酶参与。